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标准解读丨T/SHRH 036-2021《化妆品黑色素抑制测试——斑马鱼胚胎测试方法》斑马鱼助力美白功效评价
▲发布：上海日用化学品行业协会
标准号：T/SHRH 036-2021《化妆品黑色素抑制测试——斑马鱼胚胎测试方法》
历史在前进，时代在改变，但美白仍是人们不变的向往，也是化妆品永恒的话题。近年来，随着国家的发展，消费者功效护肤理念持续升级，以美白为代表的进阶型护肤需求逐步提升。面对市场上日益繁多的美白化妆品，消费者该如何选择？863检测推出一种斑马鱼检测化妆品美白功效的检测方法，使“美白”看得见，助力化妆品美白功效宣称。（注：不能替代人体功效评价试验，仅为化妆品新法规下的化妆品原料筛选、配方研发以及化妆品产品美白功效提供了一种快速筛查方法）
为响应政府推动构建化妆品行业标准体系，实现化妆品行业整体规范提升发展，由上海日用化学品行业协会组织制订并归口，由20家单位共同参与编制的T/SHRH 036—2021《化妆品黑色素抑制测试-斑马鱼胚胎测试方法》团体标准于9月30日在全国团体标准信息平台正式发布，并于10月30日起实施。
检测原理：
人体的黑色素是酪氨酸经过酪氨酸酶作用，氧化生成多巴，后者经氧化、脱羧等反应转变成吲哚醌，最后吲哚醌聚合为黑色素。
斑马鱼体内的色素形成相关基因在序列和调控机制上和人类高度相似。并且斑马鱼胚胎个体小，在发育发展初期可以全身都是透明。因此在斑马鱼黑色素形成的过程中进行管理干预，即可抑制黑色素的形成。
应用软件分析定量读取黑色素含量水平，测试比较样品组和空白组的鱼胚胎黑色素水平变化，从而计算黑色素抑制率以评价化妆品及化妆品原料的美白功效。
斑马鱼胚胎：Zebrafish embryo
指处在依靠卵黄提供能量发育阶段的斑马鱼胚胎
10%致死浓度10% Lethal concentration, LC10
受试物导致 10%受试鱼胚胎死亡的浓度。鱼胚胎凝结、没有心跳或尾巴未脱离则判定为死亡
试验产品：
祛斑美白产品
阳性对照：
0.03mg/mL 苯硫脲溶液，参考《化妆品黑色素抑制测试-斑马鱼胚胎测试方法》T/SHRH 036-2021 配制。
适用于测试通过抑制黑色素而达到美白效果的化妆品及其原料的功效评价，作为化妆品及其原料的美白效果初筛定性。
选用野生型AB品系斑马鱼胚胎
① 养殖水温宜控制在26～28.5℃，室内温度建议控制在20～25℃。
② 养殖密度宜控制在每升水1～2条鱼，以及每日固定的12～16h光照，且需保持良好的过滤系统。
③ 每天至少喂食2次，包括至少1次丰年虾（Artemia salina）幼虫，喂食间隔在3小时以上，避免过量喂食影响水质和清洁度。
① 斑马鱼配对产卵，挑选发育正常的受精后6-8h斑马鱼胚胎作为试验对象。
② 根据受试物性质配制成测试溶液。
③ 依据试验分组分别向不同孔板中添加测试溶液和斑马鱼胚胎。
④ 于28±1℃恒温箱中培养至受精后48±1h，随机挑选斑马鱼胚胎于显微镜下将胚胎壳剥离，背部朝上，进行拍照。
⑤ 用分析软件如 Image J 打开照片，对每粒鱼胚胎的头和卵黄背部区域进行标记，然后选择“测量”栏里的“测量平均强度”，选取测试结果中的“平均信号强度”作为黑色素含量指数。
黄色虚线包围部分为色素测量区域
式中：
T—受试物处理组鱼胚胎“平均信号强度”的平均值；
C—空白/溶剂对照组鱼胚胎“平均信号强度”的平均值；
P—阳性对照组鱼胚胎“平均信号强度”的平均值。
各测试组暴露完成后至少90%鱼胚胎存活，否则对应测试组结果无效。
评价受试物抑制黑色素的能力，分析受试物处理组与空白对照组的检测值是否具有统计学差异（P<0.05）。对于受试物抑制黑色素的表述，应包含受试浓度样例分析
如上图所示，黑色部分即为斑马鱼体内黑色素，如果受试样品的美白效果越好，则斑马鱼体内黑色素越少，黑色素抑制率越高。由上图可知黑色素抑制率为正数且具有统计学差异（P<0.05）情况，测试结果可作为受试物具有黑色素抑制功效的支持证据。（注：不能替代人体功效测试）
① 非动物：鱼胚胎检测方法属于非动物测试，符合全球关于动物替代测试发展趋势。
② 高通量：具有高通量优势，可快速低成本完成更多检测项目，如原料功效研究，原料筛查，配方甄选等。
③ 可视化：检测方法具有可视化优势，可让消费者直观感知产品的品质。
④ 高效率：与传统检测机构相比，斑马鱼检测更全面，能快速得到检测结果。
⑤ 低成本：相比人体临床或动物实验，斑马鱼检测成本相对较低。
