一文看懂高效液相色谱仪(HPLC)

一、HPLC介绍

HPLC全称为高效液相色谱仪(High Performance Liquid Chromatography)。是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各组分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

二、HPLC构成

液相色谱仪一般由高压输液系统（四元溶剂管理器）、进样系统（自动进样系统，样品管理器）、分离系统（色谱柱，高压注温箱）、检测系统（TUV、PDA、FLR、ELSD检测器）及数据处理系统等组成。

三、HPLC分类

1.二极管阵列检测器（DAD）

液相中使用最广的检测器，是一种选择型检测器，要求被测样品组分具有紫外吸收。DAD具有色谱峰纯度鉴定和光谱图检索功能，可为定性和定量分析提供丰富的信息。广泛应用于药品、环保、生命科学、粮食科学、农业科学、食品科学、医疗卫生等领域。

2.紫外检测器(UVD)

紫外检测器是一种应用最广HPLC检测器，当检测波长范围包括可见光时，又称为紫外-可见检测器。紫外检测器的工作原理是朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律。其特点是灵敏度高，线性范围宽，噪声低，紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动相的紫外可见光度计。

3.荧光检测器（FLD）

一种高灵敏度的选择型检测器，灵敏度比DAD高2-3个数量级。适用于具有荧光响应的痕量化合物检测，广泛应用于生命科学、环境、食品安全等领域。

4.蒸发光散射检测器（ELSD）

通用型检测器，可检测挥发性低于流动相的任何样品，而不需要样品含有发色基团。广泛用于碳水化合物、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测。

5.示差折光检测器（RID）

通用型检测器，根据物质的折射率不同来进行组分检测。凡是与流动相不同的组分，均可用这种检测器。广泛应用于高分子、糖类、脂肪烷烃等的检测。

四、HPLC优点

• 灵敏度更高（可使用各种检测器）

• 更高的分辨率

• 速度更快

• 便于样品回收（移除的流动相更少）

• 多种固定相可适用

五、HPLC应用

• 制药应用：控制药物稳定性。药物剂型的片剂溶出度研究。药品质量控制

• 环境应用：检测饮用水中的酚类化合物。污染物的生物监测。

• 法医学应用：生物样本中的药物定量。鉴定血液、尿液等中的类固醇。纺织品染料的法医分析。测定血液、尿液等中的可卡因和其他滥用药物。

• 食品和香料：软饮料和水的质量测定。果汁中的糖分分析 蔬菜中多环化合物的分析。防腐剂分析。

• 在临床检验中的应用：尿液分析、血液中的抗生素分析。肝脏疾病中胆红素和胆绿素的分析。检测脑细胞外液中的内源性神经肽等。

六、HPLC通用检测标准

1. 《中国药典》2020年版

2. 《化妆品安全技术规范》2015年版

3. GB/T 16631-2008 高效液相色谱法通则

4. GB/T 19267.11-2008刑事技术微量物证的理化检验 第11部分：高效液相色谱法

七、HPLC检测案列

7.1化学品纯度分析：

背景信息：验证合成2-羰基-四氢呋喃-3-羟基-甲基丙烯酸酯(CAS:195000-66-9)纯度

测试条件：

测试结果：

测试谱图:

7.2化妆品中禁用物质分析

背景信息：判定小样化妆品中苯酚是否符合《化妆品安全技术规范》2015年版中技术要求

测试方法：《化妆品安全技术规范》2015年版第四章2.26
测试设备：HPLC

测试结果：

测试结论：该打样的化妆品中苯酚符合《化妆品安全技术规范》2015年版中技术要求。