Ⅰ型过敏反应是最为常见的过敏反应，临床症状包括过敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏性皮炎等。开发抗过敏产品需可靠检测方法，RBL-2H3肥大细胞活化脱颗粒β-Hex检测法应运而生。肥大细胞是参与Ⅰ型过敏反应的重要细胞，内部含有丰富的嗜碱性颗粒，能够分泌β-氨基己糖苷酶（β-hexosaminidase，β-HEX）、组胺、白三烯、肝素、5-羟色胺等颗粒物质，对神经末梢、血管、黏膜下腺体产生刺激作用，造成气道血管通透性增加、黏膜水肿、黏液分泌、支气管痉挛等，引起哮喘。该方法为抗过敏产品开发提供精准工具，助力筛选有效成分，推动抗过敏领域发展，具有重要应用价值。例如，某新型抗组胺药物研发时，通过此法检测其对细胞脱颗粒的抑制效果，发现能显著降低β-Hex释放，证实其抗过敏活性。

一、肥大细胞与哮喘
过敏原透过气管上皮细胞，与IgE交联后，肥大细胞释放多种介质，通过激活其他细胞来推动炎症反应。肥大细胞通过引发支气管收缩和改变支气管屏障的通透性，促成了哮喘的症状。它们还招募其他免疫细胞，并促进这些细胞的增殖和活化。

二、实验原理
大鼠嗜碱性细胞白血病细胞株（rat basophilic leukemia cell line，RBL-2H3）纯度高、性状稳定、可传代培养，其表面高表达 IgE 受体 FcεRⅠ，具有和肥大细胞相似的细胞结构和脱颗粒途径，能模拟肥大细胞的多种功能，是研究肥大细胞脱颗粒机制的理想替代细胞。在过敏反应发生初期，B细胞在Th2细胞辅助下产生特异性IgE，IgE通过FcεRI结合到肥大细胞表面，使细胞处于“待命”状态；当机体再一次接触过敏原时，致敏状态的肥大细胞处于崩解状态，颗粒物质从胞内释放出来。实验过程中，先让抗-DNP IgE单抗与肥大细胞表面的FcεRI受体结合，当DNP抗原被引入时，与结合在肥大细胞上的抗-DNP IgE发生交联，激活肥大细胞，释放β-HEX，与底物硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷，生成的对硝基酚(PNP)在特定波长（405 nm）处的有吸收峰，从而评估细胞的脱颗粒程度。

三、测试步骤
接种：调整细胞浓度， 接种于24孔板，在培养箱中培养贴壁24h。02

1. 用PBS清洗细胞,每孔加入抗DNP-IgE单抗致敏过夜。03
2. 用PBS清洗细胞,根据MTT实验结果，药物组分别加不同浓度的样品，同时设置空白对照组与模型组，与细胞作用一定时间。04
3. 用PBS清洗细胞。模型组、阳性对照组和药物组加入DNP-BSA，37 ℃孵育激发过敏反应，空白对照组用等量缓冲液替代。05
4. 冰浴终止反应。收集到离心管中，1000rpm，4℃，离心 10 min.06
5. 收集各组细胞上清液移入96孔板。每孔加入显色液，37℃孵育。07
6. 加入终止液停止反应，用酶标仪测定 405 nm 处 OD 值，计算：

结果计算

结语

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